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取材作為原代細胞培養過程中至關重要的一步,那么原代細胞取材的注意事項有哪些呢?讓我們一起來看看吧!一、皮膚和粘膜主要取皮片,面積一般2~4平方厘米。二、內臟和實體瘤1.無菌環境;2.熟悉所需組織的類型和部位;3.要避開破潰、壞死液化部分,以防污染,盡量去除混雜的結締組織。三、血液細胞一般多抽取靜脈外周血,或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞,取材時應注意抗凝。四、骨髓、羊水、胸/腹水細胞嚴格無菌,注意抗凝,還要盡快分離培養,離心后,用無鈣、鎂PBS洗兩次,再...
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WesternBlot雖是實驗室zui常用的蛋白分析技術,但是由于它步驟繁瑣、操作流程長、影響因素多,所以導致在實驗過程中會遇到各式各樣的問題,那么你知道WB實驗常見問題有哪些呢?該如何解決呢?讓我們一起來看看吧!一、目標條帶沒有信號原因分析:1.樣品中可能含有蛋白酶,使蛋白樣品分解成小分子。2.目標蛋白濃度過低(低于檢測下線)。3.轉膜時間太短導致目標蛋白沒有充分轉移到膜上,或者轉膜時間過長導致樣品轉穿。4.一抗的特異性不佳,導致一抗無法識別目標蛋白。解決方法:1.添加蛋白...
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RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子,同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁,因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段,那么你知道RNA提取的實驗步驟是什么嗎?讓我們一起來看看吧!以Trizol法提取組織細胞為例:1.提取細胞RNA時,先離心沉淀細胞,每5~106個細胞加1mlTrizol后,反復用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細胞;2.將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP管中,在室溫15~30℃下放置5分鐘;3.在上述EP管中,按照每1mlTri...
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RNA是目前發現細胞內生物功能zui豐富多樣的生物大分子,同時是DNA與蛋白質信息傳遞的橋梁,因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時代的重要手段。那么你知道RNA提取成功的要點有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!1.組織樣本要盡可能的新鮮,避免反復凍融。2.提取時組織要充分研磨,組織量不宜過少,更不宜過多。3.加入裂解液后應給予充分的孵育時間,使樣本充分裂解。4.在用Trizol法提取時,分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,千萬不能提取到中間層,否則會導致嚴重的基因組D...
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Alzet滲透泵2002是一種小型、可植入式的膠囊滲透泵,可應用于小鼠、大鼠及其他實驗動物研究。該泵無需進行外部連接或頻繁處理,就能以恒定的速率持續給藥1天到14天的時間。Alzet滲透泵2002泵送率為0.5μl/hr(±0.1μl/hr),持續時間為14天,泵容量為200μl。Alzet滲透泵2002由3個組件組成,分別是:灌注管(fillingtube)、流量調節器(flowmoderator)、泵(pumpbodymaterials)。為了更好的使用Al...
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