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Elisa的檢測方法有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。Elisa的檢測方法有哪些？讓我們一起來看看吧！常見的有直接法、間接法、競爭法基雙抗夾心法，其中直接法和競爭法應用較少，應有最多的是雙抗夾心法，讓我們一一來看看它們是如何操作的吧！一、直接法將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標抗體直檢測抗原。相較于其他類型的ELI...

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如何利用流式進行細胞凋亡（Cell Apoptosis）分析

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)是一種細胞膜活性物質(zhì)，正常細胞中，其位于細胞膜脂質(zhì)雙層內(nèi)側(cè),在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面。凋亡早期：磷脂膜(PS)外翻，但是細胞膜保持完整性，因此PI（與DNA結(jié)合）染色為陰性。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，可以與凋亡早期外翻的磷脂膜(PS)結(jié)合。凋亡中晚期：磷脂膜(PS)外翻，但是細胞膜被破壞，AnnexinV和PI分別與磷脂酰絲氨酸和DNA結(jié)合。壞死細胞...

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Lipo3000細胞轉(zhuǎn)染的實驗步驟及注意事項

細胞轉(zhuǎn)染常用的轉(zhuǎn)染試劑很多，其中，Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛，那我們來看看Lipo3000細胞轉(zhuǎn)染的實驗步驟及注意事項吧！一、實驗前準備Lipofectamine™3000轉(zhuǎn)染試劑（ThermoFisher）、Opti-MEM（可以用無血清的培養(yǎng)基代替）二、實驗步驟1.接種細胞，使其在轉(zhuǎn)染時達到70–90%匯合度。注：對于HEK293，6孔板一般鋪50萬個細胞左右。對于PC9,24孔板一般鋪5-10萬個細胞。由于不同細胞，生長狀況不太一樣，需要根據(jù)情...

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影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？

隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，細胞轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究真核細胞基因功能的常規(guī)工具。常用于研究基因功能、基因表達調(diào)控、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中，其應用非常廣泛。既然細胞轉(zhuǎn)染如此重要，那影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？讓我們一起來看看吧！一、轉(zhuǎn)染試劑不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，因此在轉(zhuǎn)染實驗前需要根據(jù)細胞特性選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑?？梢酝ㄟ^已發(fā)表文獻和轉(zhuǎn)染試劑提供的已成功轉(zhuǎn)染的細胞株來進行選擇。二、細胞狀態(tài)轉(zhuǎn)染前細胞活力和總體健康狀況是轉(zhuǎn)染產(chǎn)生變異性的重要來源。一般建...

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細胞轉(zhuǎn)染常見方法之原理、特點及實驗步驟

隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，細胞轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究真核細胞基因功能的常規(guī)工具。常用于研究基因功能、基因表達調(diào)控、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中，其應用非常廣泛。目前實驗室最為常用的細胞轉(zhuǎn)染方法有兩種：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法和電穿孔法，接下去分別介紹這兩種方法的原理、特點和實驗步驟。一、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法1.原理陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA-脂質(zhì)體復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞（見下...

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